本发明公开一种HPV16和/或HPV18基因型的实时荧光恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针，属于生物医学检测技术领域。本发明提供的试剂盒包括核酸提取液、检测液和SAT酶液，通过优化设计更适合于HPV16和/或HPV18基因型的E6/E7mRNA检测的引物和探针，并在检测过程中分步添加各组分进行分步反应可以实现对HPV16和/或HPV18基因型核酸的快速、准确和分型检测，并且灵敏度高，扩增产物RNA易降解不会引起样本交叉污染和环境污染。