本发明公开了一种用于检测I型和II型非洲猪瘟病毒的多重荧光PCR引物探针组、方法及应用，所述荧光PCR引物探针组包括如SEQIDNo:1和SEQIDNo:2所示的引物对，如SEQIDNo:3所示的第一特异性探针，以及如SEQIDNo:4所示的第二特异性探针。本发明提供的多重荧光PCR引物探针组、试剂盒和检测方法解决了现有技术中ASFVI型和II型的鉴别性检测的成本较高，灵敏度不够，检测方法复杂等问题，实现了灵敏度高，能准确地对ASFVI型和II型毒株进行鉴别，特异性强的效果。