本发明提供一种色氨酸和亮氨酸跨链交互作用β‑发卡抗菌肽WLF及制备方法。抗菌肽WLF的序列如SEQ ID No.1所示。制备方法以色氨酸和亮氨酸跨链交互作用和PG为转角单元，抗菌肽的模板为XWRYRPGRWRYX‑NH2，其中X为疏水性氨基酸，Y为亮氨酸，当X＝F、Y＝L时，抗菌肽的命名为WLF。抗菌肽WLF对革兰氏阴性菌和/或革兰氏阳性菌引起的细菌感染性疾病均具有较好的治疗作用。本抗菌肽在取代二硫键的前提下仍然具有较好的稳定性，在保持较好的抑菌活性前提下，溶血活性较低，治疗指数高达137.27。认为抗菌肽WLF具有成为抗生素代替物的潜力。