本发明涉及酶工程技术领域，本发明公开了一种提高葡萄糖酸‑5‑脱氢酶催化制备5‑酮基‑D‑葡萄糖酸短时间内产量的方法。在葡萄糖酸‑5‑脱氢酶催化D‑葡萄糖酸氧化生成5‑酮基‑D‑葡萄糖酸的可逆反应中，本发明通过添加碱土金属离子与5‑酮基‑D‑葡萄糖酸形成沉淀，避免产物抑制现象的出现，大大地缩短了葡萄糖酸生成为5‑酮基‑D‑葡萄糖酸所需的反应时间，实现短时间内的高量生产。本发明提供的碱土金属离子钙离子、锶离子及钡离子与5‑酮基‑D‑葡萄糖酸形成沉淀后，加入稀硫酸即可将5‑酮基‑D‑葡萄糖酸置换出来，同时，不与反应底物D‑葡萄糖酸形成沉淀，并能使催化剂葡萄糖酸‑5‑脱氢酶的活性保持较好的状态。