本发明涉及二甲基色胺检测领域，为解决现有技术下使用液相色谱‑串联质谱检测二甲基色胺对仪器及操作人员要求高，不易推广，其检测速度慢的问题，公开了一种二甲基色胺半抗原和人工抗原及其制备方法与应用，所述二甲基色胺半抗原由N,N‑二甲基‑5‑羟色胺作为前驱体与戊二酸酐反应得到。由该二甲基色胺半抗原得到的二甲基色胺人工抗原可用于得到二甲基色胺单克隆抗体和二甲基色胺胶体金‑荧光检测试纸，该试纸灵敏度高，可快速检测尿液、血液、唾液与毛发中二甲基色胺，对仪器要求低，操作简便，利于对毒品检测的广泛推广。