本发明涉及基于花菁染料的靶向性比率pH荧光探针的制备和应用，该荧光探针的结构式为：本发明提供了以花菁荧光染料、三水合乙酸钠等为原料合成该荧光探针的制备方法；该荧光探针是一种具有近红外发射、高选择性和能够靶向细胞的比率pH荧光探针。首先，该荧光探针对pH表现出很高的灵敏度，探针在酸性条件下645nm的荧光显著减弱，758nm处荧光显著增强；其次，该荧光探针对pH表现出很好的选择性，不受其他常见无机离子、活性氧、活性氮、活性硫、氨基酸以及生物硫醇的干扰；此外，该荧光探针已成功用于细胞中的pH成像，可以检测细胞中的pH水平。