本发明涉及特异性识别黄曲霉毒素M1的适配体及其筛选方法与应用。本发明具体的方法为：在三段式文库中间的随机区域插入结构化序列，形成具有稳定茎‑环结构的五段式文库。以经过设计的五段式序列为初始文库，应用GO‑SELEX技术对黄曲霉毒素M1进行筛选，经过六轮的反复筛选、亲和力和特异性试验的分析验证，获得了两条能识别黄曲霉毒素M1的核酸适配体且其均具有良好的亲和性和特异性。该两条核酸适配体在准确、快速、灵敏检测食品中黄曲霉毒素M1方面具有广泛的应用前景。