本发明涉及一种细胞穿透肽修饰的阳离子热敏脂质体及其制备方法，处方包括三大类脂质成分，分别是可电离阳离子脂质成分、辅助脂质成分以及固醇类偶联物；本发明主要用于siRNA、mRNA、DNA等核酸的包载和递送。其中，利用热敏脂质体特性，常温及4℃储存稳定性良好，体内环境温度(37.5℃)脂质体膜流动性增加，脂质体主要以膜融合方式将包载物直接递送至细胞质，避免内吞‑溶酶体途径，从而保护活性物质的完整性和空间结构，提高胞内递送效率；本发明利用细胞穿透肽‑固醇偶合物发挥胆固醇和阳离子的双重作用，替换胆固醇，且降低阳离子脂质材料的用量，一方面修饰脂质体使其带正电荷，从而有利于对带负电荷活性成分的包载，另一方面，胞穿透肽‑固醇偶合物在体内代谢为无毒性氨基酸，与带有季铵头部结构的阳离子脂质相比毒性显著降低。本发明公开的细胞穿透肽修饰的核酸‑阳离子热敏脂质体可应用于生物医药领域。