本发明涉及花粉多糖提取液及其制备方法和应用，属于农业技术领域。花粉多糖提取液的制备方法，包括以下步骤：将脱除芸苔素的油菜花粉、H2SO4和水混合得到混合液，将混合液加热至沸腾后，进行回流提取，过滤，合并滤液，将壳聚糖加入滤液，得待澄清液，将待澄清液于60～80℃维持至少1小时，冷却静置后，固液分离，所得液体即为花粉多糖提取液；其中，H2SO4在混合液中的浓度为1wt％～5wt％。本发明首次将花粉多糖用于农业领域中，拓展了花粉多糖的应用领域，同时也为植物源生物抗菌剂提供了新的选择。