用于结合蛋白中萃取维生素的萃取液及其制备方法和应用，涉及维生素提取技术领域；以水为溶剂，包括如下按质量分数计的组分：碳水化合物0.05～0.75%，金属螯合物0.05～0.15%，表面活性剂0.05～0.25%，抗氧剂0.1～0.5%。本发明的萃取液，通过碳水化合物、金属螯合物和表面活性剂的配合，其可将维生素（维生素B9、维生素B12、维生素D）从对应的结合蛋白中有效萃取出来成为游离态，抗氧剂也有效地保护游离态的维生素，防止氧化，提高稳定性，为后续的检测处理提供良好的检测条件，提高检测的准确性。