本发明提供了一种卵母细胞体外成熟培养的方法及其应用。本发明的方法包括将非人动物的眼房水用于非人哺乳动物卵母细胞体外成熟。实验证实，经过该成熟方法成熟的卵母细胞，后续体外受精胚胎的发育率和核移植胚胎的发育率均明显高于对照组，显示该方法能有效提高体外卵母细胞成熟的质量。利用眼房水作为卵母细胞体外成熟培养的基础培养液，具有天然的优势，首先眼房水各种营养成分丰富，足以满足卵母细胞体外成熟所需的各种营养需求；其次，眼房水中含有的各种天然的生长因子，对于促进卵母细胞体外成熟与后期体外胚胎发育具有重要作用；再次，直接利用眼房水培养，可免去繁琐的培养液配制过程，有利于体外胚胎培养的大范围推广应用。