本发明属中医药以及化合物分离技术领域，为解决目前草夹竹桃苷获得难度大，纯度低，工艺复杂，存在燃爆危险等问题，提供一种从胡黄连中提取分离纯化草夹竹桃苷的方法。胡黄连粗粉水煎煮法提取，提取液浓缩后大孔树脂吸附，水洗脱至无色Molish反应阴性，收集5‑15%乙醇洗脱液，减压回收乙醇，干燥得草夹竹桃苷提取物；热水溶解，放冷析出沉淀，抽滤得草夹竹桃苷粗品；甲醇溶解经制备型反相液相色谱系统得高纯度草夹竹桃苷。水煎煮提取省时，大孔吸附树脂分离符合原料药制备要求，用草夹竹桃苷易溶于热水难溶于冷水的性质，结合制备液相色谱技术，简单经济、安全高效获得高纯度草夹竹桃苷，为开发以草夹竹桃苷为原料的新药提供产业化生产工艺方法。