本发明公开了一种多抗筛选的杨树多基因遗传转化方法，属于植物基因工程技术领域。本发明通过将分别带有不同抗性的多种载体组合的农杆菌同时侵染杨树叶片，并通过多种抗生素(hygromycin B、G418 sulfate和bialaphos)特定浓度的组合筛选，得到对应的阳性杨树幼苗。本发明实施例阳性转化率在70％以上，其中pBI121、pCambia1305和pEarlygate103组合转化率达到97.72％，pCambia1305和pEarlygate103组合转化率达到97.01％。本发明建立的利用多种载体上带有的抗性基因对应的多种抗生素进行组合筛选的方法能够打破杨树遗传转化的单一载体依次转化的约束性，缩短了多基因转化的转化周期，提高转化效率。本发明实施例实现了6个基因的共同转化。