本发明提供一种适用于荧光影像导航手术的照射方法、装置及存储介质，包括：预先设置测试间隔时间段，基于所述测试间隔时间段控制不同的照射设备依次对病灶进行照射；获取不同照射设备在测试间隔时间段内所获得的多个测试影像，多个测试影像包括照明测试影像以及多个荧光测试影像；确定每个荧光测试影像中荧光区域的荧光面积，基于所述荧光面积确定不同照射设备的第一照射时长；不同照射设备基于其不同的第一照射时长对病灶进行照射得到照明工作图像以及多个第一阶段荧光图像，对所述照明工作图像和多个第一阶段荧光图像融合得到合成图像。可以根据实际的肿瘤、病灶以及组织情况控制各个光路的照射时间，使得在采集病灶的荧光区域时更加的精准。