本发明公开了一种使用ES打靶技术获得的嵌合体鼠生殖遗传的挽救方法，包括以下步骤：S1多轮电转的ES克隆注射囊胚，获得低嵌合率小鼠；所述ES克隆加上EGFP表达；S2对低嵌合率小鼠进行毛色比例分析和鼠尾基因鉴定；S3小鼠精子冷冻；S4精子基因型鉴定；S5阳性比例高的精子进行体外受精IVF实验；S6受精卵培养到2细胞后进行荧光观察；S7筛选绿色荧光胚胎移植；S8出生小鼠DNA鉴定；本发明解决了多步ES技术打靶的克隆所得到的首建鼠嵌合率低生殖遗传不确定的问题。