本发明公开了一种适用于多种样本核酸提取的无醇清洗液及核酸提取试剂盒。所述无醇清洗液包括清洗液A和清洗液B，所述清洗液A包括30mM～50mM的Tris‑HCl、15％～30％的PEG、2～3M的钠盐，所述清洗液B包括30mM～50mM的Tris‑HCl、50～100mg/mL的硅基磁珠、10％～15％的PEG、1.5～2.5M的钠盐。本发明提供的核酸提取试剂盒包括所述无醇清洗液以及裂解液、蛋白酶K和洗脱液。本发明的核酸提取试剂盒可用于多类型样本(口咽拭子样本、鼻咽拭子样本、血浆、血清、痰液、唾液)的提取。采用本发明的核酸提取试剂盒可以减少乙醇残留对下游实验的影响，提高核酸纯度，进而提高检测的准确性。