本发明提供一种酶分消化结合组织块培养分离成骨细胞的方法，包括以下步骤包括以下步骤：S1、前期准备：取七日龄以内的颅骨组织，清洗后将颅骨组织剪碎成组织块；S2、酶分消化：将组织块置于离心管中，通过胰蛋白酶和I型胶原酶分步对组织块进行消化，直至组织块松散成胡絮状；S3、细胞培养：向离心管内加入培养液后静置，每隔1‑3天采取半换液方式进行换液，直至细胞从组织块周边生长出来，再更换培养液并废弃组织块；S4、细胞纯化：通过差速贴壁法去除步骤S3中离心管中的成纤维细胞，即可得到纯化的成骨细胞。本发明使用的培养方法使分离的成骨细胞的细胞纯度相比于对比例大幅度得到提升，且同时细胞培养所需的时间也大大缩短。