本发明公开了一种药物递送载体及其制备方法和应用。所述药物递送载体包括共组装的靶向多肽和穿膜多肽，所述靶向多肽包括依次通过化学键偶联的靶向部分、响应酶切部分和组装滞留部分，所述穿膜多肽包括依次通过化学键偶联的亲水部分、响应酶切部分和组装滞留部分。本发明的药物递送载体可有效负载药物，能够实现在角膜的高量富集和渗透，并且能实现在细胞级别的精确定位，在眼底微环境通过酶切作用实现重新组装并滞留，实现了可控性释药的同时延长了药物的作用时间，以低剂量给药维持药物有效浓度，降低对眼组织的毒性。