本发明涉及体外检测技术领域，尤其涉及一种测定葡萄糖含量的试剂盒及其应用。所述试剂盒中包括抗乳糜干扰试剂，所述抗乳糜干扰试剂选自多聚环氧乙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、多聚环氧乙烷‑环氧丙烷脂肪醇类非离子型表面活性剂、聚乙二醇烷基醚类非离子型表面活性剂、混合脂肪酸甘油酯类非离子型表面活性剂中的一种或多种。本发明以葡萄糖测定试剂盒的基本组分为基础，在检测试剂中加入0.01％～10％的一种或几种特定的表面活性剂，消除脂血样中乳糜对葡萄糖测定的干扰，提高脂血样本中葡萄糖检测的准确度；试剂成分简单、易于生产配制；成本低、易于商品化。