本发明公开了一种突变型鱼大眼梭鲈皮肤肉瘤病毒(WDSV)逆转录酶，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2或SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示，是通过将野生型WDSV逆转录酶类似物的氨基酸序列的第175位甘氨酸分别置换为精氨酸或组氨酸或赖氨酸得到的。同时本发明还公开了该突变型WDSV逆转录酶用于体外逆转录RNA合成cDNA的应用，具体步骤包括：利用重组微生物诱导培养得到突变型WDSV逆转录酶；突变型WDSV逆转录酶的纯化；制备逆转录反应的模板；利用所述WDSV逆转录酶进行体外逆转录反应。本发明的有益效果是：提供了一种具有较高逆转录催化效率和较强热稳定性的新的逆转录酶，并将其用于逆转录RNA以合成cDNA，对研究和开发新颖的更具优势的逆转录酶具有重要的指示作用和应用前景。