本发明涉及转基因技术领域，特别涉及表达rFC蛋白的84E突变载体及其制备方法和应用；该载体通过对sNT序列进行突变，具体突变方法为：把sNT序列的保守区84位酸性氨基酸K突变为碱性氨基酸E(记作sNTK84E突变体)使得sNT对pH不敏感，有效阻止了sNT单体在低pH下形成二聚体，解决了在pSG表达系统中，外源蛋白在丝腺腔内发生纤维化导致的不溶性问题；提高外源蛋白rFC在pSG生物反应器中的可溶性表达能力和蛋白活性，是一种简单、高效的生产rFC蛋白方法，提高了对濒危野生动物的保护。