本发明公开了一种双抗体夹心均相化学发光法猪圆环病毒2型检测试剂盒及其制备方法和应用，所述试剂盒，包括试剂R1、试剂R2、试剂R3、阳性对照和阴性对照，本发明所述试剂R1中的供体微球能够在680nm光的激发下产生单体氧；所述试剂R2中的受体微球能够与单体氧反应生成可检测的615nm化学发光信号，因此在检测时不需要清洗和分离，可以直接检测化学发光信号，从而实现猪圆环病毒2型的检测，另外，本发明的试剂盒10min内即可完成检测，且本发明的试剂盒的特异性、敏感性、重复性都很好。