本发明公开了用于治疗HCC的核酸、其制备方法、具有该核酸的CAR‑T细胞及细胞的制备方法，其序列中至少包含有如SEQ ID NO.6所述的CD226共刺激区核酸序列，以及如SEQ ID NO.7所述的4‑1BB共刺激区核酸序列。本发明促进IFN‑γ等细胞因子的产生从而克服肝肿瘤微环境的抑制作用，提高T细胞的浸润率、增殖率和存活率，让GPC3‑226BB‑CART细胞在注射到体内后，在肿瘤内存活并持续增殖，直到肿瘤被消除。