本发明提供了一种基于LC‑MS技术确定患脂肪肝病罗非鱼肝脏异常代谢特征的方法，属于生物信息学技术领域。本发明采用LC‑MS技术分别对患脂肪肝病罗非鱼和正常罗非鱼的肝脏样品进行分析，并筛选鉴定患脂肪肝病罗非鱼与正常罗非鱼之间肝脏的差异代谢物，通过对差异代谢物进行通路分析及关联性分析，能够全面且综合的分析患脂肪肝病罗非鱼肝内营养物的转化及代谢路径，确定患脂肪肝病罗非鱼肝脏异常代谢特征。本发明的方法能为阐明患脂肪肝病罗非鱼肝内异常代谢机制提供有力的理论支撑，并为鱼类营养性疾病的代谢组学研究及作用机制的阐明提供示范。