本发明公开了一种杨小舟蛾谷胱甘肽S‑转移酶MtGSTt1基因启动子与应用，属于基因工程技术领域，该杨小舟蛾谷胱甘肽S‑转移酶MtGSTt1基因启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明成功克隆出杨小舟蛾MtGSTt1基因启动子，试验证实，该启动子可用于在宿主细胞中启动下游基因表达，尤其是在植物次生物质诱导下能够启动下游基因表达，可以为植物次生物质对于杨小舟蛾MtGSTt1基因表达调控具体作用机制提供理论基础，为杨树食叶害虫新的防治技术提供理论依据和基因序列，也可以为培育出对有毒物质具有更高抗性的昆虫细胞或转基因家蚕提供备选基因。