本发明涉及狂犬病应用技术领域，具体涉及一种狂犬病病毒重组抗原和制备方法及其用途，包括如下(a)‑(c)中的一种：(a)、在N端到C端方向依次包括如氨基酸序列片段N、G以及P；(b)、在(a)中的氨基酸序列片段N、G和/或P经过取代、缺失或添加至少一个或几个氨基酸的狂犬病病毒重组抗原，且可诱发哺乳动物针对所述狂犬病病毒重组抗原的免疫反应；或(c)、具有与(a)中的狂犬病病毒重组抗原的氨基酸序列同源性的氨基酸序列，且可诱发哺乳动物针对所述狂犬病病毒重组抗原的免疫反应；上述狂犬病病毒重组抗原具有抗原性好和非特异性小的抗原表位，且相比全毒抗原具有稳定、安全、培养成本低、高效的优势。