本发明公开了一种诱导纯雌性工业大麻的方法，包括以下步骤：S1、准备诱导所需异亚丙基氨基氧乙酸和非挥发性酸、喷涂容器；S2、将异亚丙基氨基氧乙酸和非挥发性酸进行处理，获得最终产物，将最终产物进行处理，获得混合物A；S3、将混合物A通过喷涂容器对现蕾期的工业大麻植株进行喷涂，喷涂后静置反应3-5天；S4、在将混合物A对植株进行二次喷涂，喷涂完成后静置10天；S5、喷涂后10天将大麻植株上雄性花蕾去除，剩余雌性花蕾会生长出雄性花蕾，此时大麻植株为雌雄同株。本发明方法简单易操作，减少人工的劳动量，降低去雄的作业周期，同时减少对水资源和环境的污染，提高获取大麻纯雌性种子的效率，适合进行市场推广。