在抗原株与供体株具有类似的抗原性的情况下，提供一种具有两种以上的流感病毒的基因组片段的重配流感病毒的制备方法。使用包含抗原蛋白质(x)的第一流感病毒(1)、具有与株(1)类似的抗原性的抗原蛋白质(x’)的第二流感病毒(2)、具有与株(1)不同的抗原性的抗原蛋白质(y)的第三流感病毒(3)、且包含以下工序：使宿主感染株(2)和株(3)并进行共培养来制备重配流感病毒并从该病毒中选择具有抗原蛋白质(y)的流感病毒(Y)，接着使宿主感染株(1)和上述选择出的株(Y)并进行共培养，并从由株(1)和株(Y)制备的重配流感病毒中选择具有抗原蛋白质(x)的流感病毒(X)。