本发明公开了一种骨肽注射液及其制备方法与应用。该制备方法包括：取猪或牛四肢骨，粉碎、脱钙、脱脂和洗涤后得到预处理溶液；向预处理溶液中加入酶进行降解得到降解液；将降解液经超滤浓缩，亲和层析处理，收集目标组分的洗脱液；将洗脱液浓缩后，加入活性炭吸附澄清的氯化钠溶液，混匀过滤，添加稳定剂，灌装灭菌后得到骨肽注射液。本发明通过控制预处理过程中的脱钙方法、脱脂方法的选择，洗涤液的选择，选择亲和层析，获得高产量的注射液；进一步经过降高血压的动物试验表明，本发明提供的骨肽注射液具有降低血压的药用前景。