本发明公开的一种病理切片机标本定位装置及其使用方法，属于实验装置技术领域。包括基座、锁止器、球形万向关节和线状激光平行旋转器，可以安装在目前市面上常见的病理切片机内部，通过球形万向关节调节线状激光发生器发出的线状激光落在样本上的角度，通过安装在2个相互垂直平面的2个病理切片机标本定位装置，分别调整其发出的线状激光与刀片及样本头运行轨迹平行，通过2条相交激光定位刀片的切面，调整样本的拟切面与激光定位的平面重合。能够有效减少珍贵标本的损失，并显著缩短调节标本角度所需的时间，定位尺寸精确。该装置的兼容性好，安装和使用时不破坏病理切片机的原本结构，操作简便，不依赖操作者的技术，具有良好的应用前景。