本发明公开了一种狂犬病毒灭活抗原的定量检测方法。该方法，包括：首先用SDS‑PAGE法和TEM法对目标峰定性鉴定；然后用蛋白定量试剂盒测定标准品的浓度；将此标准品进行系列稀释，用凝胶色谱柱在色谱仪上检测标准品在280nm处的吸收峰，建立浓度和峰面积的线性回归方程；根据线性回归方程和待测样品的峰面积计算得到待测样品中的狂犬病毒灭活抗原浓度。本发明的方法可用于狂犬病毒生产的质量控制，具有快速、稳定、重复性好的优点，可指导疫苗的生产，对提高疫苗品质起到重要作用。