本发明公开的是一种利用生物传感器检测土壤中可提取态四环素类抗生素的试纸条及方法。该试纸条包括滤纸条、固定液、敏化剂以及四环素生物传感器细菌菌剂，所述试纸由市场购买的普通滤纸裁剪组成，所述四环素生物传感器细菌菌剂为Escherichia coli BL21菌株携带pMTLacZ质粒(即Escherichia coli BL21/pMTLacZ菌株)。pMTLacZ质粒为本发明人自主设计的可受多种四环素类抗生素诱导标的合成质粒，pMTLacZ质粒可在不同浓度的四环素的诱导下产生不同量的β半乳糖苷酶，可降解试纸条上固定的X‑gal显色剂，直观显示样品中四环素类抗生素的浓度。用本发明试纸条同时检测土壤中可提取态六种四环素类药物的方法简便、快速、直观、准确、便于携带、环保、适用范围广、成本低、易推广使用。