本发明涉及植物保护技术领域，尤其涉及一种生防菌株TMN-1及生防菌剂的制备方法和应用。本发明的生防菌株TMN-1为肉座菌属真菌，含有生防菌株TMN-1的生防菌剂的制备为取烟草种植地区青枯病发病地块健康烟株根际土，采用稀释涂布平板法在孟加拉红选择性培养基上筛选出生防菌株TMN-1，将筛选出的生防菌株TMN-1在PDA培养基上进行活化，得到的纯生防菌株TMN-1在PD培养液中于180rpm、28℃振荡培养5天，于7000rpm离心8-10min，用无菌水调节孢子浓度为1×108cfu/mL。本发明的生防菌剂应用于烟草种植中，能够促进烟草健康生长，且还能够改善土壤微生物群落结构，对烟草青枯病具有良好防治效果，能够减轻烟草青枯病的危害。