一种半滑舌鳎性别标签piR‑mmu‑29271668的应用，所述性别标签piR‑mmu‑29271668来源于鱼精浆外泌体，本发明通过small RNA测序分析，筛选到两种鱼显著差异表达的标签piRNAs作为候选，通过实时定量PCR验证，最终确定了对两种鱼具有指示作用的piRNA生物标志物，标签piRNAs为piR‑mmu‑29271668，序列为GCATTGGTGGTTCAGTGGTAGAATTTTGGA，并以此为基础开发制备了检测试剂盒。本发明方法具有无创，高效的优点，且鉴定结果可靠，是首次通过定量检测来判别半滑舌鳎的遗传性别。