本发明公开一种以牛粪和秸秆(核桃修剪枝和棉秆)等农业有机废弃物为原料的腐熟固体发酵菌剂，包括酿酒酵母菌（Saccharomyces cerevisiae）、甲基营养型芽孢杆菌（Bacillus methylotrophicus）、嗜热脱氮芽孢杆菌（Geobacillus thermodenitrificans）、简单芽孢杆菌（Bacillus simplex）及布氏乳杆菌（Lactobacillus parabuchneri）五株菌。本发明还公开一种制备腐熟固体发酵菌剂的方法，本发明提供的活性菌剂利用五种菌之间的协同作用在堆肥物料中，快速形成优势菌群，充分发挥除臭，促进腐熟过程的作用。同时解决了农业有机废弃物有效利用率不高，自然发酵堆肥腐熟时间长，产品质量差的问题。经腐熟发酵处理的肥料可提高农田土壤肥力，调节土壤酸碱度，具有良好的生态效益和经济效益。