本发明公开了一种培养3D细胞环的模具，包括下模座和上模座，所述下模座包括底盘，所述底盘为圆盘形，中心设置有向上凸起的圆台，所述圆台上方设置有中央柱；所述上模座包括空心柱和支架，所述支架共有两段，均固定设置在所述空心柱的外圆面上，且两段所述支架以所述空心柱为中心对称分布，所述支架上表面与所述空心柱的顶面平齐。有益效果在于：制成的细胞环肉眼可见，内径达2mm，细胞外基质丰富，可以徒手夹取细胞环，便于观察和后续实验操作；模具设计简洁，易用，操作性强，规模化生产后成本低，跟现有培养板尺寸完美匹配，可扩展性强，可同时大批量完成细胞环制备。