本发明涉及一种pH响应型纳米银组装体的制备方法，包括如下步骤：1)将硝酸银溶解在油胺和油酸中，升温还原反应，经不良溶剂沉淀，得到银纳米粒子；2)将两亲性高分子溶于良溶剂，加入具有pH响应性基团的修饰剂，室温下搅拌反应，透析后得到pH响应的两亲性高分子；3)采用薄膜分散法或乳化溶剂挥发法，将步骤1)中得到的银纳米粒子组装修饰到步骤2)中得到的pH响应的两亲性高分子，得到pH响应型纳米银组装体。本发明还涉及该制备方法所得的pH响应型纳米银组装体及其应用。该pH响应型纳米银组装体具备良好的抗菌性能，不仅可以有效抑制耐药菌的生长，且对细菌生物膜具有抑制和破坏的作用。