本发明公开了一种端粒酶活性检测方法，包括：利用CHAPS法提取待测细胞中的端粒酶；利用捕获探针和端粒酶进行延伸反应，反应产物与信号探针溶液进行杂交反应；用超分辨成像技术对杂交反应产物进行检测。本发明采用超分辨成像技术能够检测到低浓度端粒酶形成的微弱信号，实现了更高灵敏度的端粒酶活性检测；采用Cy5染料修饰的端粒互补序列DNA作为信号探针，获得更高分辨率的图像及更低的检测限；避免了PCR反应过程以及信号扩增过程，大大简化了端粒酶活性检测步骤，同时也提高了检测结果的可靠性。