本发明公开一种小型鱼类DNA无损伤提取方法及DNA提取液，该提取方法包括：1）用棉签从鱼体一侧的腮盖后缘向尾部刮取鱼体表粘液；2）将棉签浸没于DNA提取液中，涡旋、静置；3）将棉签拧干，加入异丙醇，混匀后-80℃过夜处理或以液氮处理10min；4）样品自然解冻，离心，弃上清，加入乙醇，再次离心，取沉淀干燥，即提取获得基因组DNA；所述DNA提取液包括：20mL 1M Tris、5mL 0.5M EDTA、12.5mL 2M NaCl、57.5mL ddH2O、5mL质量分数为10%的SDS；本发明可应用于小型鱼类DNA的无损伤提取，操作简便，检测准确性高，对鱼类产生的应激反应低，宜于推广应用。