本发明提供了一种灵芝孢子粉壁多糖，所述灵芝孢子粉壁多糖由四种糖残基构成主链，由β-D-Glcp-(1→和β-D-Glcp-(1→4)-β-D-Glcp-(1→构成支链的葡聚糖。本发明还提供上述灵芝孢子粉壁多糖的制备方法。本发明方法处理后的灵芝孢子中可以获得两种多分支的β-葡聚糖，在细胞水平没有表现出免疫作用，意外地，在多种动物免疫模型实验上，发现该多糖具有多种免疫调节活性，是灵芝孢子粉中的主要活性成分。因此，极大地扩展了灵芝孢子粉壁的再利用应用范围。