本发明提供了一种培养人羊膜上皮细胞的培养基及应用，该培养基由以下四种组方组成：（1）改良的MCDB153基础培养基；（2）血清替代组合物；（3）细胞生长因子组合物；（4）一种小分子物质。本发明所提供的培养基不含血清或血浆（包括动物或人血清或血浆），因此，使用该体系培养人上皮细胞，在细胞治疗过程中将避免因动物血清或血浆引起的人畜共患病的风险。此外，该培养基组方成分明确，避免了因使用血清或血浆或血小板等血制品引起的批次间差异。该培养基适于人上皮细胞包括羊膜上皮细胞的培养，在组织工程等研究中应用前景广阔。