本发明涉及一种用于检测小麦中有无黄叶基因的专用引物、试剂盒及其应用，属于分子遗传学技术领域。该检测小麦中有无黄叶基因的引物包括BE494262、CD453721和/或BF202681，用引物BE494262、CD453721和/或BF202681分别对待测小麦基因组DNA进行PCR扩增，如果这3个引物得到的PCR扩增产物中分别有大小为420bp、1500bp和580bp的条带，则待测小麦中具有黄叶基因。本发明的3个专用引物BE494262、BF202681和/或CD453721可以准确的检测小麦黄叶基因是否存在，可用于育种早代选择，缩短育种周期，提高育种效率，具有操作简单成本低廉等优点。