本发明涉及一种斑马鱼胚胎微孔板排列添加装置，包括负压力室室壁、胚胎添加室室壁以及多孔隔板，所述胚胎添加室室壁固定设置在多孔隔板顶面的四周密封连接并与多孔隔板顶面形成无顶盒状的胚胎添加室，所述负压力室室壁与胚胎添加室室壁一体成型，且所述负压力室室壁与多孔隔板的底面封闭连接形成无底盒状空间，并在使用时通过薄膜覆盖该无底盒状空间形成负压力室，所述多孔隔板中设有成矩阵排列的且贯通胚胎添加室和负压力室的胚胎捕获通孔。与现有技术相比，本发明可以在不影响胚胎正常生长发育情况下一次性完成微孔板的斑马鱼胚胎添加工作，还可以反复使用；且显著提高了实验效率。