本发明涉及肿瘤组织TIL细胞制备方法及专用培养基，所述方法包括：瘤旁组织获取、细胞消化、细胞原代培养、细胞传代培养和细胞收集步骤，其中，原代培养基为以RPMI 1640培养基为基础，包含以下浓度组分：10％体积的人源血清、20‑45ng/ml的碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、1‑5mg/ml的核黄素、70‑90ng/ml的皮质醇、10‑25mg/ml的一水磷酸二氢钠、47‑62ng/ml的重组人白血病抑制因子(LIF)、500‑800U/ml的IL‑2；传代培养基为以RPMI 1640培养基为基础，包含以下浓度组分：10％体积的人源血清、20‑40mmol/L的HEPES、1000‑2000U/ml的IL‑2、0.03‑0.07mmol/L的β‑巯基乙醇、5‑15ng/ml磷酸钠。对现有培养基进行了改良，采用不同的培养基对TIL细胞进行针对性培养，提高TIL细胞的扩增能力，同时减少培养周期，降低培养复杂程度，减少了IL‑2的使用量，从而降低毒性反应。