本发明属于生物技术领域，具体涉及一种快速鉴别检测血清4型禽腺病毒的双标记探针实时荧光PCR方法。该方法是通过以下步骤实现的：首先根据禽腺病毒基因组序列，设计一对引物FAV‑FQ‑F、FAV‑FQ‑R和探针P；然后提取FAV病毒DNA，采用超纯水溶解；最后采用设计的引物和探针进行实时荧光PCR检测。本发明提供的方法可快速灵敏准确地检测血清4型FAV，极大地缩短检测时间，可区分同期流行其他的主要血清型；同时避免了普通PCR的假阴/阳性情况，具有快速、准确、灵敏、重复性好等优点，可用于FAV样品的实验室检测。