本发明公开了一种基于磁性分离和量子点标记的副溶血性弧菌检测试剂盒，它包括：抗副溶血性弧菌免疫磁珠、量子点标记的抗副溶血性弧菌的纳米荧光生物探针；所述的抗副溶血性弧菌免疫磁珠是羧基化磁珠利用EDC和NHS活化后，再与兔抗副溶血性弧菌多克隆抗体IgG共价偶联；所述的纳米荧光生物探针是羧基化的荧光量子点活化后，与副溶血性弧菌鸡卵黄抗体IgY偶联；利用本发明制备的试剂盒进行副溶血性弧菌的检测具有特异性强、重复性好、灵敏度高的优点，可用于对食品中副溶血性弧菌的快速检测。