本发明公开了一种检测羊四种病原菌的多重PCR检测用引物及检测方法，所述引物分别为：肺炎克雷伯氏菌上下游引物、奇异变形杆菌上下游引物、大肠杆菌上下游引物和沙门氏菌上下游引物；所述检测方法采用引物，分别以肺炎克雷伯氏菌DNA、奇异变形杆菌DNA、大肠杆菌DNA、沙门氏菌DNA为模板进行多重PCR扩增反应，并将PCR扩增反应产物加入上样缓冲液后，置于含溴化乙锭的琼脂糖凝胶中，进行电泳检测，验证引物的特异性。本发明的有益效果是：只需要常规仪器就可以具有高敏感性的分子检测方法，这种方法的检测敏感性高，同时不需要复杂的操作系统，可以在普通实验室条件下实施检测，并具有操作简单、敏感性高、快速等特点。