本发明公开了一种检测细菌四环素类耐药基因的引物及试剂盒，属于微生物检测技术领域。本发明提供的引物序列如SEQ ID NO：1～12所示，通过在NCBI的基因序列库中比对多种菌及临床隔离株四环素类耐药基因序列，在保守位点处设计的特异性引物，能够对多种细菌tetA(P)、tetB(P)、tetC1、tetJ、tetM、tetQ/P6种四环素类耐药基因进行快速检测。本发明还公开了包含上述引物的检测细菌四环素类耐药基因的试剂盒，能快速、准确检测细菌氨基糖苷类抗生素相关耐药基因。