本发明公开了一种用于鉴定金钱豹的多重PCR引物，其中，所述多重PCR引物包括如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示的引物对1，以及如SEQ ID No：3和SEQ ID No：4所示的引物对2。本发明还公开了一种利用多重PCR鉴定金钱豹的方法，该方法包括：提取待测样品的总DNA并对总DNA进行PCR扩增；将扩增后的产物做琼脂糖凝胶电泳检测；其中，所述多重PCR引物为上述多重PCR引物，若泳道中出现2条条带，则判断所述待测样品为来自金钱豹的样品。本发明还公开了一种上述多重PCR引物或鉴定方法在鉴定金钱豹中的应用。通过设计上述两对引物，实现了简便易行且经济实用地鉴定金钱豹的目的。