本发明涉及一种烟草遗传转化后的抑菌培养方法，包括抑菌剂的配制、培养容器消毒、农杆菌转化、培养基配制、共培养、筛选培养、生根培养和抗性苗检测。采用本发明的烟草遗传转化后的抑菌培养方法，培养容器和培养基都无需进行高温高压灭菌，减少了工作量和能源消耗，简化了烟草遗传转化后的培养环节，降低了烟草遗传转化后的培养成本；本发明的烟草遗传转化后的抑菌培养方法，操作简单，只要按不同的培养基配方配制后，再加上抑菌剂即可，实用性强，推广性好；本发明的烟草遗传转化后的抑菌培养方法与常规方法比较，可以降低成本10％以上。